Moxi GO II在CAR-T疗法中的应用
随着对肿瘤研究的不断深入及治疗技术的不断发展，其临床治疗手段包含了传统的手术、放疗、化疗，靶向治疗和综合治疗，再到近些年的免疫治疗，皆为了清除肿瘤、“治愈”癌症。其中，在2012年成功治愈白血病女孩Emily的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法备受瞩目。
• 何为CAR-T疗法？
嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法，英文全称Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，是一种治疗肿瘤的精准靶免疫疗法，是一种极有前景的细胞免疫疗法。
CAR-T疗法通过基因工程技术将T细胞激活，给其装上定位导航装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体），将T细胞改造成“超级战士”，即CAR-T细胞，专门识别并高效消灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的（图1）。与传统药物或化疗相比，CAR-T疗法对肿瘤细胞的杀伤更为精准，在提高疗效的同时大幅减轻了毒副作用，在临床肿瘤治疗，尤其是血液肿瘤的治疗上取得了显著效果。随着研究的进展，新靶点的不断发现，CAR-T疗法在实体瘤领域也有着卓越的进步。
图1. CAR-T疗法原理示意图
• CAR-T疗法的基本流程
标准的CAR-T治疗流程一般持续5周左右，主要分为7步：
• Moxi GO II在CAR-T疗法中的应用
CAR-T疗法过程非常复杂和高端，涉及T细胞的筛选收集、基因改造、活化、培养、扩增、修饰等，每一步都需要精心的设计和质量控制，哪一步出现差错都会影响CAR-T疗法。细胞的精确计数和体积的精准测量对确保疗法的成功起着至关重要的作用。
CAR-T疗法中需要细胞计数和体积测定的步骤：
图2. CAR-T疗法的基本流程
1） 外周血单核细胞（PBMC）的采集
通常采用全自动血细胞分离机从患者血液中分离采集PBMC，作为CAR-T细胞改造的起始原料。在此过程中，精确的细胞计数、细胞活率检测对于确定细胞浓度和确保后续步骤有足够数量的高质量细胞至关重要。Moxi GO II快速流式细胞仪采用库尔特原理结合荧光流式检测，提供精确的细胞绝对计数和细胞活率检测。
2） T细胞的分离
接下来进一步用磁珠从PBMC中分离足够的高质量T细胞。此过程中，细胞的数量和细胞的纯度非常重要。细胞数量影响后续制造过程中的计算和调整，而细胞纯度会直接影响CAR-T终产品的质量。比如，T细胞中混入B细胞杂质，可能会导致病人对CAR-T疗法产生抗性。Moxi GO II快速流式细胞仪可在数秒内完成给出细胞浓度和细胞大小分布结果，为产品评估提供数据支撑。
3） T细胞的激活、扩增、转导和CAR-T细胞的收获
这一步是为了产生足够多的CAR-T细胞用于治疗。T细胞的激活窗口很短，监测细胞何时准备好十分关键，细胞体积是T细胞活化状态的关键指标。研究者通过监测激活后的T细胞体积，可以比较不同激活方式的差异；通过监测T细胞体积达到某一程度时再进行转导，可以更好地控制CAR基因的转入时间，提高转导成功率。Moxi GO II快速流式细胞仪采用库尔特原理对细胞大小和体积进行检测，无需标记，几秒内即可给出结果，随时监测细胞状态。
准确的细胞计数、活率测定也是这些过程所必须的，监测细胞生长、增殖和活力，优化转导效率，对于确定CAR-T细胞产物的产量和生存能力至关重要。采用Moxi GO II快速流式细胞仪可轻松实现这一目标。
4） CAR-T细胞的质控
在CAR-T产品回输之前，需要对其进行全面严密的质控，包括细胞活力、细胞浓度和细胞大小分布评估。细胞计数和大小测定是评估最终产品效力、纯度和整体质量的关键。细胞大小的偏差会影响其功能和效力。Moxi GO II快速流式细胞仪可在数秒内完成准确的绝对计数和精准的粒径测量，可在CAR-T产品的质控过程中发挥稳定可靠的作用。
综上可以看出，在整个CAR-T流程中，细胞计数和大小测定在监测细胞群、优化过程和确保CAR-T细胞疗法的可靠一致性方面发挥着关键作用。准确的细胞分析能够优化给药、质量控制，最终获得更好的疗效。Moxi GO II快速流式细胞仪完美满足以上CAR-T研究中所需的所有细胞分析需求。作为世界上唯一一款将库尔特原理和双荧光检测技术相结合的仪器，Moxi GO II可以在几秒内提供精确的细胞数量和体积数据（CV <3%），同时还可满足基于荧光检测的活率分析，GFP表达，表型分析等，集细胞计数和流式应用与一体，为研究者提供了极大的便利。
Moxi GO II快速流式细胞仪
Moxi GO II采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量，同时采用488nm激光光源，结合两个PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根据需要更换），进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。仪器设计小巧轻便，无需预热，开机即用，预设程序，触屏操控，运行后10秒即可给出测试结果，使用后也无需清洁维护。无论是经验丰富的流式专家，还是初试身手的实验小白，Moxi Go II都可以助您轻松完成实验。
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