Moxi GO快速流式细胞仪助力线粒体功能调控研究
急性肾损伤（Acute kidney injury，AKI）是一种危及生命的疾病，发病率和死亡率都很高，而缺血是肾脏损害的主要原因之一。缺血性损伤（Ischemic renal injury，IRI）可引起近端肾小管上皮细胞（Proximal tubular epithelial cells，PTECs）变性、坏死，从而导致急性肾损伤。越来越多的证据表明，急性肾损伤的核心病理特征是线粒体功能的改变。线粒体NAD+依赖性酶Sirtuin 5（SIRT5）则是线粒体结构和功能的关键调节因子，可调节能量代谢，并促进包括肾脏在内的高代谢需求器官的线粒体功能。Sirtuin 5已被证明可以增强人体内的心脏、大脑能量代谢，在缺血期间具有保护作用，但其在急性肾损伤中的作用尚不清楚。
英国伦敦大学Haschler等人对此进行了研究，试图确定SIRT5在体外人PTECs（hPTECs）缺血诱导的线粒体功能障碍中的作用，相关成果以“Sirtuin 5 depletion impairs mitochondrial function in human proximal tubular epithelial cells”为题发表在《scientific reports》上。
线粒体膜电位（ΔΨM）是线粒体结构的核心决定因素之一，是线粒体ATP合成的重要调节因子，因此确定SIRT5的抑制是否会影响ΔΨM进而减少线粒体ATP的产生至关重要。本研究中，作者采用美国Orflo Technologies公司的Moxi GO快速流式细胞仪来评估hPTECs的ΔΨM变化。研究人员通过RNAi（RNA干扰，RNA interference）技术构建了SIRT5抑制hPTECs实验组SIRT5 RNAi，并以非靶向siRNA（小干扰RNA，Small interfering RNA）构建的hPTECs为对照组（Control RNAi），进行了对比研究。四甲基罗丹明甲酯（TMRM，一种可吸附活性线粒体探针，用于测定ΔΨM的变化）被用作荧光指示剂。Moxi GO的测定结果显示，SIRT5 RNAi的TMRM荧光强度更低，表明SIRT5抑制降低了ΔΨM，进而影响了细胞的能量代谢。5个独立的重复实验都呈现出高度一致性的结果（如图1所示）。
图1. Control / SIRT5 RNAi的ΔΨM变化结果
左图为以TMRM作为荧光指示剂，使用Moxi Go流式细胞仪测定的荧光强度曲线，右图为5组重复实验的TMRM荧光强度统计结果
结合其他相关实验，本研究证明了SIRT5是hPTECs中正常线粒体功能所必需的一种关键性缺血诱导酶，可调节hPTECs的线粒体结构和功能，促进代谢稳态，保护线粒体免受破碎和降解，并降低对氧/营养缺乏模型诱导的线粒体功能障碍的易感性；SIRT5耗竭损害了ATP的产生，降低了ΔΨM，并引发了hPTECs中的线粒体碎裂。
Moxi GO II
Moxi GO目前已升级为Moxi GO II，该产品采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量，同时采用488nm激光光源，结合两个PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根据需要更换），进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。仪器设计小巧轻便，无需预热，开机即用，预设程序，触屏操控，运行后10秒即可给出测试结果，使用后也无需清洁维护。无论是经验丰富的流式专家，还是初试身手的实验小白，Moxi Go II都可以助您轻松完成实验。
美国Orflo Technologies公司是一家非常专业的细胞分析仪器研发和制造企业，拥有多项专利技术，产品以库尔特原理的高精细胞计数仪和超快流式细胞仪为主。
环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。作为Orflo Technologies中国地区独家代理，环亚生物科技有限公司全权负责Orflo Technologies产品在中国地区的推广、销售，为广大用户提供专业的技术咨询和产品服务。
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https://doi.org/10.1038/s41598-021-94185-6
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