Moxi Go II快速流式细胞仪助力糖尿病相关血管并发症的研究
糖尿病作为全球性的慢性疾病，其患者数量每年激增，并导致一定死亡率， 多与心血管异常有关，可引发严重肢体缺血和截肢。血管缺陷是由机体现有的血管系统恶化和血管生成障碍共同引起的。血管生成的主要调节因子之一是缺氧诱导因子（HIFs），其β亚基又称芳烃受体核转运子（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT），与糖尿病的发展和进展有关。血管生成主要由内皮细胞(ECs)驱动，整体和EC特异性ARNT缺失都与胚胎致死有关。内皮细胞中的ARNT缺失加剧了糖尿病介导的缺血诱导血管生成损伤。在糖尿病背景下，ARNT在内皮中的表达减少，可能解释了为什么糖尿病是导致血管内皮功能障碍和组织修复以及再生延迟的最大危险因素，并最终表现为严重的血管并发症。
来自美国芝加哥大学研究团队，对内皮芳烃受体核转运体（ecARNT）介导2型糖尿病小鼠外周血缺血血管生成反应进行研究，相关研究成果于2021年6月发表在Frontiers in Cell and Developmental Biology上。这篇文章研究了在2型糖尿病小鼠中， ecARNT的表达下降与血管生成缺陷之间的关系。研究人员采用了一种携带可诱导的EC特异性ARNT敲除突变的小鼠模型（Arnt△EC,ERT2），发现这种小鼠在非糖尿病和糖尿病条件下都出现了血流恢复受损的情况，但糖尿病动物的损伤程度更大。此外，研究还发现，通过siRNA介导的ARNT活性敲低可以减少在高葡萄糖条件下培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中的管状形成和细胞存活。Arnt△EC,ERT2突变还降低了小鼠骨骼肌微血管内皮细胞（MVECs）的细胞存活率，同时增加了活性氧（ROS）的产生。当这些细胞在高糖浓度下接受ROS抑制剂处理时，Arnt△EC,ERT2 MVECs的存活率增加。这表明在高糖条件下，ARNT保护细胞免受ROS产生造成的损伤。
文章中有关细胞存活率统计采用细胞凋亡实验进行测定，并使用Moxi GO II 快速流式细胞仪(Orflo Technologies)进行测定。实验方案如下：转染ARNT-siRNA或对照siRNA后，HUVECs (1.1 × 105)在不含FBS的培养基中孵育6小时，然后在高糖（HG）或正常葡萄糖（NG）培养基中孵育。使用0.25%胰蛋白酶从皿中收集HUVECs，并使用Moxi GO II 每24小时计数一次，连续计数3天。HG或NG处理48小时后，通过细胞凋亡测定HUVECs和MVECs的细胞存活率。用PBS洗涤细胞，使用Annexin V和PI试剂盒(Orflo Technologies)FITC偶联的Annexin V和PI进行双染色，继而通过Moxi GO II 进行细胞凋亡检测。
图1 在高糖(HG)或正常培养基(NG)条件下，ARNT表达对细胞活力和细胞活性氧(ROS)产生的影响。
(A)如所示，HUVECs中存在HG或NG培养基时，处理组用siRNA转染诱导ARNT敲低，对照组为control-si。(B)高糖条件下，处理组Arnt△EC,ERT2 和对照组Arntfl/fl WT小鼠分离的MMVECs中ROS水平。(C) Mito-TEMPO抑制ROS对细胞活力的影响。从处理组Arnt△EC,ERT2 和对照组Arntfl/fl WT小鼠中分离的MMVECs在HG培养基中培养48 h，然后给予0.5μM的Mito-TEMPO 24 h。使用Moxi GO II测定细胞活力。数据以mean±SEM表示(每组n = 6-8)。*P ＜0.01. (D)内皮细胞ARNT在糖尿病血管生成中的作用示意图。
文章中采用Orflo Technologies公司的Annexin V和PI试剂盒以及Moxi GO II快速流式细胞仪，进行细胞凋亡检测，区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并定量分析各自所占比例。对诱导的EC特异性ARNT缺失HUVECs以及MVECs的细胞活力进行统计分析。从图1中可以看出，通过siRNA介导的ARNT活性敲低，能够降低在高葡萄糖条件下培养的HUVECs管状结构形成和细胞存活率。Arnt△EC,ERT2突变会降低MVECs的存活率，同时增加活性氧（ROS）的产生。当这些细胞在高葡萄糖浓度下接受ROS抑制剂处理时，其存活率得到了提高。本研究首次建立了ecARNT与糖尿病血管生成受损之间的联系，并证明了在糖尿病中，ecARNT缺乏通过增强ROS的负面作用来加剧血管生成受损的作用机制。
Moxi GO II快速流式细胞仪
传统流式细胞仪设备体积大，构造复杂，价格昂贵，通常作为平台产品仪器使用。仪器操作复杂，维护繁琐，对操作者要求较高，往往需要进行专业操作培训，具备专业知识技术才能使用。同时平台产品排队周期长，限制了科研人员的使用。
针对这种情况，美国Orflo Technologies公司将行业公认的细胞计数和大小测量金标准——库尔特原理（Coulter Principle）与荧光流式检测技术相结合，推出的新一代快速流式细胞仪——Moxi GO II，满足了研究人员对细胞凋亡检测的需求。
美国Orflo Technologies公司是一家非常专业的细胞分析仪器研发和制造企业，拥有多项专利技术，产品以库尔特原理的高精细胞计数仪和超快流式细胞仪为主。作为中国地区独家代理，环亚生物科技有限公司全权负责Orflo Technologies产品在中国地区的推广、销售，为广大用户提供专业的技术咨询和产品服务。
环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。
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https://doi.org/10.3389/fcell.2021.691801
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